تعیین توالی DNA تکنیکی است که از دهه 70 درجهان آغاز شد و روشی برای شناسایی توالی بازهای موجود در ژنوم (A,T,C,G)  مي­باشد. تعيين توالي تشخيصی جهت تشخيص موتاسيون (جهش) و تعيين توالي تحقيقاتی معمولاً جهت شناسايي توالی ژن­های جدید مورد استفاده قرار مي­گیرد.

معرفی روش Sanger sequencing

روش Sanger برگرفته از نام فردریک سنگر می­باشد. این دانشمند برجسته برنده جایزه نوبل در سال 1958 برای شناسایی توالی اسید آمینه پروتئین و در سال 1980 برای تعیین توالی DNA است. در شکل زیر جزئیات این روش را ملاحظه می­فرمایید:

روش کار :

در ابتدا با اضافه کردن "ddNTPs " واکنش­های تفکیک شده انجام می­گردد. سپس در 4 ستون مختلف ژل، Gel running صورت می­گیرد. در انتها توالی­ها از قسمت پایینی ژل خوانده می­شوند: (قطعات کوتاه­تر بدلیل سبک بودن از لحاظ جرم مولکولی در قسمت­های پایینی ژل قرار می­گیرند)

در مرحله بعدی به منظور ردیابی محصولات واکنش، بایدآنها را با رادیواکتیو یا فلورسانس نشاندار کرد، در این مرحله محصولات نشاندار شده تحت تابش اشعه لیزر قرار می­گیرند که در نهایت با آنالیز دستگاه sequencer ، نتایجی مشابه شکل زیر بدست می­آید:

کیفیت گراف­ها و دقت نتایج بدست آمده، با چگونگی تهیه نمونه، ارتباط مستقیم دارد. نمودار فوق مربوط به نمونه­ایی است که طبق الگوی پیشنهادی تهیه شده است، همانطور که در شکل ملاحظه مي­شود، تمامی پیک­ها کاملا واضح بوده و به درستی نوع بازهای آن تشخیص داده شده است. درحال حاضر معتبرترین شرکت سازنده دستگاه­های Genetic Analyzer یا همان Sequencer  فعالیت دارد Applied bioSyestems-ABI مي­باشد. گروه ژنتیک کدون خدمات تعیین توالی به روش Sanger را بوسیله دستگاه 3500 Applied bioSyestems-ABI با بالاترن کیفیت ظرف مدت 3 تا 5 روز به محققان عزيز ارائه مي­دهد.